微生物的計數(shù)有哪些方法？

　　血球計數(shù)板法:
 

　　血球計數(shù)板是一種有特別結(jié)構(gòu)刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四條溝和兩條嵴，中央有一短橫溝和兩個平臺，兩嵴的表比兩平臺的表面高0.1 mm，每個平臺上刻有不同規(guī)格的格網(wǎng)，中央0.1 mm2面積上刻有400個小方格。通過油鏡觀察，統(tǒng)計必定大格內(nèi)微生物的數(shù)量，即可算出1毫升菌液中所含的菌體數(shù)。這種方法簡便，直觀，快捷，但只適宜于單細胞狀態(tài)的微生物或絲狀微生物所產(chǎn)生的孢子進行計數(shù)，并且所得結(jié)果是包括死細胞在內(nèi)的總菌數(shù)。
 

　　液體稀釋法：
 

　　對未知菌樣做連續(xù)十倍系列稀釋，根據(jù)估計數(shù)，從*適宜的三個連續(xù)的10倍稀釋液中各取5毫升試樣，接種1毫升到3組共15只裝培養(yǎng)液的試管中，經(jīng)培養(yǎng)后記錄每個稀釋度出現(xiàn)生長的試管數(shù)，然后查*大或然數(shù)表MPN(most probably number)得出菌樣的含菌數(shù)，根據(jù)樣品稀釋倍數(shù)計算出活菌含量。該法常用于食品中微生物的檢測，例如飲用水和牛奶的微生物*。
 

　　染色計數(shù)法：
 

　　為了彌補一些微生物在油鏡下不易觀察計數(shù)，而直接用血球計數(shù)板法又無法區(qū)分死細胞和活細胞的不足，人們發(fā)明了染色計數(shù)法。借助不同的染料對菌體進行適當?shù)娜旧?，可以更方便的在顯微鏡下進行活菌計數(shù)。如酵母活細胞計數(shù)可用美藍染色液，染色后在顯微鏡下觀察，活細胞為無色，而死細胞為藍色。
 

　　平板菌落計數(shù)法：
 

　　這是一種*常用的活菌計數(shù)法。將待測菌液進行梯度稀釋，取必定體積的稀釋菌液與合適的固體培養(yǎng)基在凝固前均勻混合，或?qū)⒕和坎加谝涯痰墓腆w培養(yǎng)基平板上。保溫培養(yǎng)后，用平板上出現(xiàn)的菌落數(shù)乘以菌液稀釋度，即可算出原菌液的含菌數(shù)。一般以直徑9cm的平板上出現(xiàn)50-500個菌落為宜。但方法比較麻煩，操作者需有熟練的技術(shù)。平板菌落計數(shù)法不僅可以得出菌液中活菌的含菌數(shù)，而且同時將菌液中的**進行了一次分離培養(yǎng)，獲得了單克隆。
 

　　比例計數(shù)法：
 

　　將已知顆粒(如霉菌孢子或紅細胞)濃度的液體與一待測細胞濃度的菌液按必定比例均勻混合，在顯微鏡視野中數(shù)出各自的數(shù)目，即可得未知菌液的細胞濃度。這種計數(shù)方法比較粗放。并且需要配制已知顆粒濃度的懸液做標準。
 

　　試劑紙法：
 

　　在平板計數(shù)法的基礎(chǔ)上，發(fā)展了小型商品化產(chǎn)品以供快速計數(shù)用。形式有小型厚濾紙片，瓊脂片等。在濾紙和瓊脂片中吸有合適的培養(yǎng)基，其中加入活性指示劑2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC，無色)待蘸取測試菌液后置密封包裝袋中培養(yǎng)。短期培養(yǎng)后在濾紙上出現(xiàn)必定密度的玫瑰色微小菌落與標準紙色板上圖譜比較即可估算出樣品的含菌量。試劑紙法計數(shù)快捷準確，相比而言避免了平板計數(shù)法的人為操作誤差。
 

　　生理指標法：
 

　　微生物的生長伴隨著一系列生理指標發(fā)生變化，例如酸堿度，發(fā)酵液中的含氮量，含糖量，產(chǎn)氣量等，與生長量相平行的生理指標很多，它們可作為生長測定的相對值。
 

　　膜過濾法：
 

　　用特殊的濾膜過濾必定體積的含菌樣品，經(jīng)丫叮橙染色，在紫外顯微鏡下觀察細胞的熒光，活細胞會發(fā)橙色熒光，而死細胞則發(fā)綠色熒光。